FITC Konjugácia protokoly

fluoresceín izotiokyanáty , sa bežne označuje ako FITC - výrazné " fit - c , " k nádchu sa " ditsy " - je fluorescenčná značka , ktorá je chemicky viazaná , alebo konjugované , s inými molekulami , ako sú proteíny a protilátky . Protilátka konjugovaná s FITC môže označiť aj ako " FITC - značené protilátky . " FITC je budený svetlom s vlnovou dĺžkou 488 nm a vydáva fluorescenčné energiu detekované pri 530 nm . Vedec ju môžete vidieť s fluorescenčným mikroskopom alebo použitie zariadení , ktoré detekuje fluorescenčné emisie a zaznamenáva ich. Metódy

FITC konjugácia nadväzuje na základné protokol . Napríklad , FITC a protilátky by sa zmieša v určitom pomere do skúmavky a otáča sa pri teplote miestnosti po dobu jednej hodiny . Ak chcete odstrániť nenaviazaný FITC z roztoku , sa naleje na afinitnú chromatografickú kolónu - sklenená trubica naplnené guličkami , ako gél , ktorý sa bude viazať na nekonjugovaný FITC . Medzitým bude FITC protilátky označené prietok cez kolónu sa zhromažďujú na použitie.
Úvahy

Pred začatím konjugácia , výskumný pracovník by mal zvážiť niekoľko bodov . Po prvé , FITC je veľmi nestabilná , a nemali by byť vystavené svetlu - to by malo byť v fóliové rúrky za všetkých okolností . Po druhé by sa konjugácia a teplota môžu byť upravené pre proteín teplotne citlivé . A konečne , rôzne proteíny a protilátky môžu mať rôzne FITC väzba kapacity , takže nájsť správny pomer protilátky FITC je dôležité , príliš málo FITC je protilátka nezistiteľné a príliš veľa môže zmeniť svoju špecifickosť . Z tohto dôvodu, predbežné malých konjugácia v rôznych pomeroch FITC na protilátky by mali byť vytvorené paralelne . Akonáhle je optimálny pomer založená , rozsiahle konjugácie môže byť vykonaná .
Používa

Lekári a vedci používajú FITC značené protilátky , hormóny a rast faktory v širokej škále aplikácií a testov . Napríklad , kmeňových buniek nájdené v krvi má na svojom povrchu molekulu CD34 s názvom . Laborant môže miešať krv pacienta s FITC - značenou protilátkou špecifickou pre CD34 , a spustiť bunky pomocou prietokového cytometra , ktorý používa laserový lúč , aby sa FITC fluoreskujú . Ďalej cytometer oddeľuje fluorescenčné CD34 bunky od ostatných krvných buniek , a lekári môžu použiť tieto izolované kmeňových buniek pre liečebné procedúry .

• Predchádzajúca strana: Ako vypnúť MacBook kontrolky klávesnice 
• Ďalšia strana: Silicon Keyboard Protector pre MacBook Intel spôsobuje jej prehriatie