CFSE Protocols

CFSE alebo karboxyfluorescein - sukcinimidyl - ester , je fluorescenčné bunkové farbenie roztok použitý v migrácie lymfocytov štúdiách . Lymfocyty sú biele krvinky v krvi , že majú schopnosť pohybovať sa z krvného obehu zachytiť cudzie mikroorganizmy , hrá dôležitú úlohu v imunitnej obrany . CFSE môže byť tiež použitý na označenie tymocytov a embryonálny bunky , v závislosti na " imunológie a bunkovej biológie . " Human Lymphocite farbenie

technici pripravia bunkovej suspenzie s 20 miliónov buniek na ml v 0,1 percent fetálneho bovinného séra ( FBS ) a soľným roztokom pufrovaným fosforečnany ( PBS ) . Dodávajú CFSE a nechajte zavesenie sedieť počas ôsmich minút , v závislosti na The University of Kansas Medical Center . Predhriatej FBS Potom sa pridá a bunky sa inkubujú na vodnom kúpeli pri teplote 98,6 stupňov Celzia po dobu 10 minút . Bunky sa potom odstredí počas piatich minút , supernatant sa odstráni a bunky sa premyjú v roztoku 2 percentá FBS /PBS trikrát . Bunky sú fixované formaldehydom .
Zjednodušená CFSE farbenie

technici odstredivky vzorky krvi , odstránenie červených krviniek . Neskôr sa umyť lymfocytov s PBS na odstránenie voľného proteínu . Aby bolo možné pozorovať bunkové delenie po dvoch dňoch , CFSE sa pridá v nízkych koncentráciách počas ôsmich minút , potom sa reakcia blokovaná fetálnom teľacím sérom . Bunky sa premyjú dvakrát PBS /FCS . Tento protokol môže byť použitý v " in vivo " alebo " in vitro " experimenty , podľa The Hedrick Lab na University of California .
Protokol pre aktiváciu naivných CD8 T buniek v vitro

naivné T bunky je lymfocyt , ktorý sa diferencované v kostnej dreni . Tento typ buniek je považovaný za zrelý , a bunky reagujú na nové patogény , že imunitný systém sa nikdy stretol . Technici inkubovať chrípkového vírusu a buniek vzoriek na ľade po dobu 30 minút , odstredivky a pokračovať v procese inkubácie po dobu 18 hodín pri teplote 98,6 stupňov Celzia . Neskôr , bunky sa zafarbia CFSE a výsledky sú analyzované na základe prietokovej cytometrie .

• Predchádzajúca strana: Ako nakonfigurovať Exchange automatickej konfigurácie 2007 
• Ďalšia strana: Proliant ML - 270 G3 Špecifikácie